RANGKUMAN INSTRUMENTASI

Viscometer (Ostwald)

→Viskositas

· Bilas dengan NaCl fisiologis, W.b. 37

· Reservoir I : serum 5 ml

· Reservoir II : Bola karet

· Hisap (bola karet) sampai miniskus serum melebihi garis atas

· Lepas bola karet sampai miniskus garis/skala atas kemudian catat waktunya yyang dihitung stopwatch

· Tunggu hingga mencapai miniskus garis bawah kemudian catat lagi

· Catat waktu tempuh skala atas – bawah = A(detik)

Pengukuran dilakukan 2 kali untuk mendapatkan nilai rata rata, misalkan A detik

· Bilas NaCl fisiologis 2 kali lalu dengan aquades 2 kali

· Ulangi dengan cara yang sama untuk aquades sampai B detrik

· Hasil =

· Nilai normal serum : 1,4 – 1,8

Water Stills menghasilkan destilata, hasil destilata

→Aq. Destilata (aquadest)

Prinsip : pemisahan/pemurnian berdasarkan perbadaan titik didih

Mendidih → uap → embun → tampung = aquadest

Hasil :

Air murni

Bebas garam yang terlarut

Jernih

Tidak berwarna, berbau dan berasa

Steril (bial ditutup rapat), bebas pirogen (sesuatau, entah itu mikroorganisme ataupun benda asing lainnya yang ditolak tubuh) [~kondensor & penampung)

Dapat digunakan untuk suntikan i.v ( intra vena)

Alat distilata = distilator

Untuk pemurnian → sifat khusus zat yang dipakai

Air murni : hanya

Fibris : demam, salah satu reaksi tubuh jika ada benda asing masuk

Intravaskuler : langsung ke pembuluh darah

Deionizer (menghasilkan air bebas ion)

Prinsip : menukarkan ion yang ada menggunakan ion exchanger, sehingga bebas garam

Cara kerja : air tak murni melewati kation dan anion exchanger resin → air bebas ion

Kation : , , diganti oleh kation resin(pembawa dan pengikat kation) :

Anion : , , , , diganti oleh resin anion → dibebaskan

yang bebas ion.

Hasil :

Bebas garam

Tidak steril, dan tidak bebas pirogen

Tidak dapat digunakan untuk i.v

Kapasitas produksi tinggi

Filtrasi lebih dulu dapat membuat resin lebih awet

Water filter : penyaringan air

Penyaringnya menggunakan nylon yang dilapisi Al = gravity water filter, yaitu bergantung pada air yang menetes kebawah karena aganya grafitasi

Prinsip : pemisahan berdasarkan perbedaan ukuran partikel

Hasil :

Bebas partikel dengan ukuran yang sesuai pori pori

Bebas bakteri

Pembuatan larutan pewarna (stain), pembilas alat gelas.

Tidak boleh digunakan untuk larutan standar

Tidak boleh digunakan untuk tes kimia

Tidak boleh digunakan untuk larutan reagen/ analisa

Daya saring bergantung pada gravitasi

Kromatografi

Pemisahan berdasarkan perbedaan BM (berat molekul)

TSW ETT : pemisahan pigmen tumbuh tumbuhan

Prinsip dasar : pemisahan senyawa kimia berdasarkan BM dengan menggunakan sistem “ solvent-substrat”

Tidak membutuhkan alat elektrik, kadang kadang dengan optical scanning

Macam macam kromatografi :

1. Kromatografi kertas

2. Kromatografi lapis tipis (thin layer chromatografi, TLC)

3. Kromatografi kolom ( liquid column chromatografi)

4. Kromatografi gas → HPLC

Naik (ascending chromatografi) Turun ( descending chromatografi)

Kromatografi kertas

Kromatografi kertas

Alat :

1. chamber/ glass jar (kotak, toples berdiameter bulat)

2. standar

3. kertas kromatografi/kertas saring

4. solvent ( larutan dengan komposisis tertentu diisikan pada chamber, berfungsi sebagai fase gerak)

5. spotter ( penotol sample)

6. penggaris

7. sistim pengamatan

*buat kontrol di kertas kromatografi untuk melihat apakah Rf kontrol dengan sampel sama, jika sama, dapat melihat literature

Prinsip kromatografi kertas

Ø proses pemisahan o.k 2 gaya yang berlawanan :

1. gravitasi : mempengsruhi zat dengan BM besar, mekin cpt ke bawah

2. gaya kapiler (capillarity attraction) : mempengaruhi zat dengan BM kecil, makin cepat ke atas

Ø keterbatasan waktu :

sebelum solvent mencapai pinggiran kertas

Prosedur

isi chamber dengan solvent

tertutup rapat, 15-30 menit

(jenuh dengan uap) → gaya kapiler maksimal, penguapan minimal

masukkan kertas kromatografi yang sudah di “spat” ( plot sampel, dengan cara menotolkan zat yang akan dipisahkan) dengan sampel pada garis diatas permukaan solvent

tertutup rapat, biarakan, amati, angkat/hentikan sebelum garis solvent mencapai pinggiran kertas kromatografi

keringkan

identifikasi dengan cara yang sesuai ( tandai dan beri no apa bila ada tanda yang muncul pada waktu basah dan kering)

Identifikasi

Rf (rate factor)=

RF : ki=onstan untuk sistem “solvent-substrat tertentu jadi bisa dibandingkan dengan table

Sampel kalibrasi/kontrol, >baik

Solvent:

Solvent-substrat cocok untuk sampel, terutama campuran , Hac(asam asetat) dan suatu alkohol (butanol)

Khusus asam amino asam amino dalam urin : (L.alanin, L.histididn, L.leucin)

Butanol : Hac : = 12 : 3 : 5

(perbandingan dapat berfariasi berdasarkan waktu atau lama pengerjaan)

Umumnya = 40% seluruh solvent

Kromatografi kertas dua arah (Two dimentionla paper chromatograpy)

Kromatografi kertas dua arah dilakukan apabila pada penggunaan kromatografi kertas hasilnya tidak sempurna karena BM fraksi-fraksi sebanding atau hampir sama besar (spot merupakan garis)

Solvent kedua p.u. nya 15 % dalam

Prosedur = k.kr.l →diputar

Substrat

Kertas filter

Special/k.kromatografi lebih semakin baik, daya kapiler lebih baik

Label : arah solvent

Bervariasi berat dan porositasnya

→menentukan kecepatan proses pemisahan fraksi fraksi

Umum dipakai k.kr. No 1

Waktu : Development time

Variasi : 15 menit-24 jam tergantung ukuran substrat

Kualitatif : (tidak terlalu lama), tidak perlu terpisah sempurna Kuantitatif : harus terpisah sempurna satu sama lainnya

Jenis sampel

Tujuan pemisahan

Sistem solvent-substrat

Pengamatan :

1. Sinar UV (sinar dengan zat tertentu akan tampak noda) : absorrpsi → gelap

2. Semprot encer : →coklat

3. Semprot dengan Ninhydrin → fraksi-fraksi dibedakan berdasarkan warna-warna

Kromatografi lapis tipis ( thin layer chromatography, TLC)

Prinsip dasarnya, sama dengan kromatografi kertas, bedanya fase diam(masa yang dipakai untuk kertas yang digunakan) dilapiskan pada plat : gelas, metal atau materi lain yang mempunyai permukaan rata

Pelapis pada fase dianm = adsorbent/sorbent : alumina, microcrystalline cellulose

Soerbent terbaik : zat padat/ keras, memiliki titik leleh tinggi

Plat tipis :

Suspensi sorben//buffer ( sampel tidak terurai/tetap)

Lapiskan/semprotkan pada plat, tebal 250 (0,25 mm)

Aktifkan ( dikeringkan, karena jika dalam keadaaan basah, ruang antar molekul terisi air, sedangkan daya adsorbent hanya ada dalam keadaan kering) : kadar min

Modifikasi :

1) Asam/basa/buffer ditambahkan pada suspense sorbent

2) Komponen sorbent

Solvent TLC

Dipengaruhi oleh :

Macam elutropic (dielectric constant = = derajat kepolaran)

TLC sebanding dengan kekuatan elektrostatik relatif solvent, substrat, sampel

Kekuatan apenarikan bervariasi sebanding dengan komponen komponen campurannya

Pemilihan “solvent-sorbent” = sistem yang kompleks untuk sampel tertentu.

Detectors :

1) Thermal conductivity detectors

2) Flame ionization detectors

3) Election capture detectors

4) Detektor detekror lain

Laboratorium klinis TLC

Golongan lipid Steroid Karbohidrat Glioksida Aldehida Keton Obat, vitamin, zat- zat toksis

Phenol Alkohol Alkaloid Protein Asam amino Senyawa amin

Pengamatan TLC

Pada umumnya → karena terbentuk warna

A. Plat tipis siap pakai mengandung (cair<<), member daya lekat pada kaca → iluminasi uv : → fluoresensi ( pada identifikasi dengan UV) sedangkan fraksi-fraksi gelap (sampel→absorbansi UV).

B. Reagen pewarna

1. Ninhydri n : asam amino, protein, peptide, garam garam amino

2. Fluoresecamine untuk amine primer, asam amino kecuali prolin dan hidroksiprolin

Obat : amphetamine

Senyama amin alifatik :

Etanilamin

Metal etil amin

Cara ini :

Tidak perlu pemanasan

5-10 menit setelah “spray” → timbul fluoresensi (untuk Rf)

Fluoresensi dapat diukur pada uv 366 nm

3. Dragendorf (bismuth subnitrat dalam 20% HOAC)

Cholin

Phosphatids (lecithin, lysoleciyhin, sphingomyelin)

Alkaloid-alkaloid (atropine, strychnine, nicotin, morphine, methadone)

4. Asam phosphomoblidat ( 5% dalam isopropanol)

Lipid, steroid, lactones, hydroxyacids, ketoacids dll.

Sensitivitas 0,1-1,0

5. Curpic acetate 3% dalam 8%

Lipid

Perlu pemanasan sensitivitas : 1

6. Ag acetate (Silver acetate) 1% dalam

Barbiturates

Obat obatan :

Iodoplatine

Mercuric sulfate

Diphenylcarbazone

Toxicology System : deteksi obat dalam urin = cara cepat

Lapis tipis : silica gel (siap pakai)

Solvent hanya dibedakan atas :

1) Untuk barbiturate

Etil asetat : methanol : 28%amonia – 90 : 7 : 3

v Development : 35 menit

v Pengeringan : , 5 menit

v Pewarnaan : fluorescanime

2) Untuk alkaloid dan ampetamin

Solvent = etil asetat : methanol : 28% ammonia : = 85 : 13,5 : 1,0 : 0,5

v Development : 35 menit

v Pengeringan : , 5 menit

v Pewarnaan : iodoplatinate

v Persiapan sampel kompeks

v Perlu pH tertentu

Problem dalam TLC & Paper Chromatography

1. Substrat bebas kontaminasi

2. Sampel tidak “overspotted”

Kering → masuk jar → tailing ( apabial diamsukkan dalam keadaan basah terjadi tailing)

3. Jar = chamber bebas kontaminasi

Equilibrated (diseimbangkan)

Bertutup rapat

4. Plat (untuk TLC) setelah diangkat letakkan mendatar, keringkan udara

Kesalahan

1. Tutup jar dibuka

→ spot difuse ( spot-nya melebar)

→ waktu deviasi memanjang

2. Sampel berlebihan → tailing

3. Spot sampel tidak kering → tailing

4. Solvent kontak dengan sampel → tailing

5. Jar tidak terutup sempurna atau letak plat tidak sempurna → solvent front tidak menentu

6. Pengamatan sulit/tidak jelas karena bahan karing sempurna tidak diwarnai

7. Sistem solvent – substrat tidak cocok/ kontaminasi → pengamatan sulit

Liquid Chromatography/column chromatography = kromatografi kolom

Dipakai untuk fraksi yang larut dalam “chleating solvent” (sbd solvent) = fase gerak

Gaya gravitasi = dari ujung atas ke bawah

Kolom : dari gelas berisi sorbent

Isi : penuh/mampat dengan sorbent (sorbent material) (alumina) = fase diam

Fraksi yang diabsorpsi oleh materi dalam kolom → penurunan dihambat → kecepatan berbeda beda antar fraksi

Fraksi fraksi ~ pita pita (band) dalam kolom

+ elemen/solvent → ditampung cairan yang keluar dari kolom

Seri aliquot (seri penampung penampung kecil), pewarna urut

Analisa fraksi, mis : spektrofotometri

ok ok, rangkuman yang ini ngga jelas yah, ntar ak kasih link d 4 sharednya, tapi berhubung koneksi tidak mendukung untuk upload, kapan kapan aja yah, hehehhehe